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黃曲霉毒素總量免疫親和柱是怎么操作的?操作時(shí)又要注意什么?

發(fā)布時(shí)間: 2022-09-08  點(diǎn)擊次數: 3051次
  黃曲霉毒素總量免疫親和柱測定的基礎是抗原、抗體反應,抗體連接在柱體內,樣品中的黃曲霉毒素經(jīng)過(guò)提取、過(guò)濾、稀釋?zhuān)缓缶徛耐ㄟ^(guò)黃曲霉免疫親和柱,在免疫親和柱內毒素與抗體結合,之后洗滌免疫親和柱除去沒(méi)有被結合的其他無(wú)關(guān)物質(zhì)。用甲醇洗脫黃曲霉毒素,然后注入到分析儀器中用于檢測。
 

 

  原理:
  樣品經(jīng)提取液提取、過(guò)濾、稀釋?zhuān)缓笸ㄟ^(guò)鍵合有黃曲霉毒素總量免疫親和柱。此時(shí),黃曲霉毒素被親和柱中的抗體特異性的吸附,用水或緩沖液將免疫親和柱上的雜質(zhì)除去,然后用甲醇使抗體變性,從而將黃曲霉毒素從親和柱上洗脫下來(lái)。最后,用HPLC或熒光計進(jìn)行定量檢測。
 
  黃曲霉毒素總量免疫親和柱的操作步驟簡(jiǎn)介:
  1、 提取樣品:研磨、稱(chēng)重50g樣品;用甲醇/水(80/20 V/V)混合物將樣品高速混勻1分鐘。
  2、 過(guò)濾:將提取的樣品濾膜過(guò)濾,然后再過(guò)0.4μm濾膜。
  3、 吸附、淋洗:將濾液2ml加到8ml PBS緩沖液(pH7.2)后,通過(guò)AflaCLEAN凈化柱,流速不大于1mL/min;用10ml水清洗親合柱;用甲醇1ml 兩次將黃曲霉毒素從親合柱上淋洗下來(lái),并收集于HPLC進(jìn)樣小瓶中。
  4、 測定:HPLC直接進(jìn)樣,在經(jīng)過(guò)柱分離后,被UVE衍生化,被熒光檢測器記錄各種黃曲霉毒素的濃度。
 
  注意事項:
  1、黃曲霉毒素對人體有害,應戴手套操作;
  2、使用過(guò)的玻璃容器及黃曲霉毒素溶液用5%濃度的NaClO溶液浸泡過(guò)夜;
  3、不要使用過(guò)了有效日期的免疫親和柱;
  4、免疫親和柱不使用時(shí)要2-8℃保存,不可凍存;
  5、使用前,免疫親和柱需回至室溫(22-25℃);
  6、取樣量:根據實(shí)際情況可以適當增減,但不可太少,同時(shí)提取液體積要按比例隨之改變;
  7、pH:上柱液pH要在6~8之間,若偏離此范圍需要HCl或NaOH調節pH。
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